Estudio de la apoptosis y de la expresión de proteínas involucradas en su control y en los mecanismos de vigilancia genómica, en los tumores de ovario de estirpe epitelial

Abstract

Introducción: Los carcinomas de ovario son tumores de mal pronóstico ya que se diagnostican en estadios avanzados. La apoptosis es un tipo de muerte celular geneticamente programada y de gran importancia para el mantenimiento de la homeostasis tisular. La expresión de oncogenes como el bcl-2, y la inactivación del gen supresor tumoral p53, reducen la susceptibilidad de las células para entrar en un programa de apoptosis, mientras que la expresión de bax la aumenta. Los mecanismos de vigilancia genómica, se consideran elementos clave en el control de la división celular y, por ende, el cáncer. Objectivos: Los tumores epiteliales de ovario son un grupo heterogéneo de neoplasias en los se ha estudiado los mecanismos de apoptosis y de vigilancia genómica, ya que son procesos que intervienen en la carcinogénesis y en la evolución de los tumores, así como en su respuesta terapeútica. Material y Métodos: Se estudió la sobreexpresión de las proteínas p53, bcl-2, bax, hus-1 y rad-9 en 130 tumores epiteliales de ovario . El índice apoptótico (IA) se evaluó mediante el marcaje in situ del DNA fragmentado (TUNEL) y en secciones teñidas con Hematoxilina-Eosina (H-E). Asimismo, otras variables clínico-patológicas como la edad, el estadío de la FIGO, el tipo y el grado de diferenciación histológica, necrosis, el índice mitótico y el seguimiento de la paciente El análisis se realizó con el paquete estadístico SPSS 10.0. Resultados : El IA detectado en secciones H-E y TUNEL fue alto en la mayoría de los carcinomas (seroso, endometrioide y de célula clara), mientras que la mayoría de los casos de cistoadenomas, tumores de bajo potencial de malignidad y los carcinomas de estirpe mucinoso mostraron un IA bajo (p=0,001). Todos los tumores benignos mostraron una expresión negativa para p53. La distribución de casos con positividad para p53 fue llamativa en los carcinomas serosos. Sin embargo, una fuerte positividad para bcl-2 se vió en los tumores benignos y en los tumores borderline serosos. La expresión de bcl-2 fue importante en los carcinomas de célula clara y en los carcinomas endometrioides, y sin embargo ausente o poco frecuente en los tumores borderline mucinosos y en los carcinomas, tanto mucinosos como serosos (p=0,034). Altos niveles de proteína bax se relacionó con los tumores borderline y en los diferentes tipos de carcinomas. Resultados similares se observaron en la expresión de hus-1 (p<0,05). En el análisis univariado, el alto IA en H-E y TUNEL, se correlacionaron significativamente con tiempos de supervivencia y periodos libre de enfermedad cortos (p<0,01). Además, la alta expresión de p53 , también, se correlacionó con mal pronóstico. Sin embargo, la alta expresión de proteína bcl-2 se correlacionó con mejor pronóstico (p=0,01). En el análisis multivariado se seleccionaron como factores pronósticos independientes la edad (p=0,02), el estadio de la FIGO (p=0,017) y el IA (p=0,019) . Por otro lado, la edad (p=0,01), el estadío de la FIGO (p=0,038), así como la necrosis (p=0,023) y la expresión de p53 (p=0,005) se consideraron factores pronósticos independientes para el periodo libre de enfermedad. El coeficiente de correlación de Spearman fue 0,75 (p<0,05) entre el IA en H-E y TUNEL. También se confirmó una correlación positiva entre el IA y las proteínas p53 y bax con la expresión de proteína de vigilancia genómica hus-1 (p<0,05).Conclusiones: 1- La expresión de bcl-2 fue alta en los tumores benignos y borderline, mientras que la expresión de p53 fue superior en los malignos. 2- Existen diferencias significativas en la expression de proteínas p53, bcl-2 y bax y en el IA entre los tipos histológicos. 3- Hay una correlación positiva entre la expresión p53 y el IA con otros factores pronósticos. 4 - En el análisis univariado el IA, la alta expresión de p53 y la baja expresión de bcl-2 se correlacionó con cortas supervivencia y cortos periodos libre de enfermedad. 5- En el análisis multivariado para el tiempo de supervivencia se demostró que el IA es un factor pronóstico independiente. 6- El análisis multivariado para el periodo libre de enfermedad puso de manifiesto que la expresión p53 es un factor pronóstico independiente. 7- El método más adecuado para valorar el índice apoptótico es la cuantificación sobre las secciónes teñidas con H-E. 8- La expresión de hus-1 es alta en la mayoría de los carcinomas y baja en los tumores borderline y cistoadenomas. 9- La expresión de hus-1 presenta una correlación positiva con el IA y los factores pro-apoptóticos.

Introduction: Ovarian epithelial carcinomas have a poor prognosis and it is related to the absence of symptoms in the majority of early stages of the disease. Apoptosis is type of cell death that is highly regulated and critically important for maintaining homeostatic cell numbers. Expression of oncogenes, such as bcl-2 , and inactivation of tumour suppressor genes, such as p53, reduce the susceptibility of cells to undergo apoptosis, meanwhile the expression of bax increase it. The check-points proteins has been recognised as a key element in controlling cell division, and cancer. Objective: The tumours of ovary are a heterogeneous type of tumours in which we have studied the apoptosis and checkpoints mechanism in order to establish the importance of this factors in ovarian carcinogenesis, progression and therapeutics response of these tumours. Methods: Tumour specimens from 130 consecutive epithelial tumours of the ovary were examined for over expression of p53, bcl-2, bax, hus-1 and rad-9 proteins. The apoptotic index (AI) was evaluated by modified terminal deoxynucleotydil- transferasa- mediated deoxyuridine triphosphate-biotin nick end-labelling (TUNEL) methods and in Hematoxilin-Eosin stain in histological sections. Other variables such as age, tumour type, FIGO stage, histological grade, necrosis, mitotic index and presence of recurrences and or metastases were also analysed. Statistical analyses were implemented sing the SPSS 10.0 package. Results : The AI detected by H-E and by TUNEL was high in the majority of carcinomas (serous, endometrioid and clear cell), where as cistoadenomas, tumours of low malignant potential and mucinous carcinomas mostly showed low AI (p=0,001). All benign lesions were p53 negative. The distribution of p53 positive cases was particularly important in serous carcinomas. Strong bcl-2 was seen in benign, and borderline serous tumours. The bcl-2 expression was most often seen in clear cell and endometrioid carcinomas, but infrequent or absent in mucinous borderline tumours, mucinous carcinomas, and serous carcinomas (p=0,034). Increased levels of Bax were related to borderline tumours and to malignant transformation. Similar results were observed with the expression of Hus-1 (p<0,05. In univariate analysis, high AI by H-E and by TUNEL, significantly correlated with shorter survival and shorter free period of illness (p<0,01). In addition, the high expression of p53 was also correlated with adverse prognosis. However the high expression of bcl-2 was correlated with better prognosis (p=0,01). In multivariate analysis the age (p=0,02), the FIGO stage (p=0,017) and the AI (p=0,019) revealed an independent prognostic factors for survival. On the other hand, the age (p=0,01), the FIGO stage (p=0,038), necrosis (p=0,023) and p53 expression (p=0,005) revealed an independent prognostic factors for free period of disease. The Spearman coefficient was 0,75 (p<0,05) between the AI in H-E sections and TUNEL techniques. There were positive correlation between the AI, p53 and bax and the expression of checkpoint protein hus-1 (p<0,05). Conclusions: 1- The high expression in bcl-2 was seen in benign and borderline tumours. Meanwhile the expression of p53 was higher in malignant tumours. 2- There was statistical significant differences in the expression of p53, bcl-2 and bax protein and the AI among the different histological types. 3-There were a positive correlation between the expression of p53 protein and the AI with other prognostic factors. 4 - In univariate analysis the AI, the high expression of p53 and the low expression of bcl-2 significantly correlated with shorter survival. 5- In multivariate survival analysis the AI revealed an independent prognostic factor. 6- In multivariate free period of illness analysis the expression of p53 revealed an independent prognostic factor. 7- The most adequate method evaluate the AI is the hematoxilin-eosin sections. 8- The expression of hus-1 is higher in carcinomas and low in benign and borderline tumours. 9- The expression of hus-1 shows a positive correlation with the AI and with the pro-apoptotic factors.