Caracterización molecular del gen de la ß-lactamasa SHV-1 en

Abstract

La naturaleza genética del gen de la ß-lactamasa SHV-1 ha sido analizada en 97 cepas de <i> Klebsiella pneumoniae </i> procedentes de productos patológicos humanos y no relacionadas epidemiológicamente. Mediante IEEA se detectaron las bandas de pI 7,6 (SHV-1) en 74 cepas, 7,1 (LEN-1) en 13 cepas y 5,4 (TEM-1) en 10 cepas. Entre las 74 cepas SHV-1, 40 mostraron una doble banda; 20 con pI 7,1 y 20 con pI 5,4. La mayoría de las 74 cepas SHV-1 presentaron plásmidos (76,7%). La transferencia por conjugación de la ß-lactamasa SHV-1 sólo fue posible en 5 casos (9,3%). Se realizó una PCR-RFLP SHV-1 específica del DNA cromosómico que resultó positiva para 93 de las 97 cepas y fue negativa únicamente en 4 cepas productoras de TEM-1. También se analizó el DNA cromosómico de las 97 cepas, en un intento de aproximación al locus génico de SHV-1 mediante restricción por endonucleasas (RFLP) y Southern-blot. La digestión con EcoRI mostró al menos una banda positiva de hibridación en 96 cepas; 2 bandas fueron detectadas en 8 muestras. Únicamente en 1 cepa productora de la ß-lactamasa TEM-1 la hibridación fue negativa. El análisis de las secuencias de DNA no mostró diferencias en las regiones promotoras del gen, ni secuencias de fin de la transcripción adicionales; únicamente mutaciones puntuales que determinaron variantes alélicas. Se describieron algunas nuevas variantes que representaron cambios en la secuencia de aminoácidos de la proteína (SHV-27, 28, 32 y 33 y la LEN-2). Como resultado de los estudios de Southern-blot y secuenciación podemos postular que SHV-1 y LEN-1 están situados muy cercanos y en tándem en el cromosoma bacteriano de <i> K. pneumoniae </i>. Nuestros resultados apoyan la hipótesis de que el ancestro de SHV-1 fue originado en el cromosoma bacteriano de <i> K. pneumoniae </i>.<br/><br/>Esta tesis obtuvo un Excelente "cum laude" por unanimidad. <br/><br/>Como complemento puede consultarse Chaves, J. et al., Antimicrob Agents Chemother 2001;45:2856-61.