Caracterización de la estadificación molecular en carcinoma de colon. Correlación clínico-histológica

Abstract

ANTECEDENTES:

El tratamiento del carcinoma colorectal (CCR) en estadios I-II es quirúrgico, aunque un 25% de pacientes pueden recidivar. El estadio ganglionar es un factor pronóstico independiente y determina el tratamiento quimioterápico. El estadiaje ganglionar histológico (pN) se realiza con tinción de hematoxilina-eosina (HE), método poco sensible para detectar pacientes con riesgo de recidiva. Las técnicas moleculares detectan células tumorales en el 25-50% de los ganglios linfáticos (GLs) de CCR que se han diagnosticado como negativos por HE, las cuales se asocian en el CCR precoz a mayor riesgo de recidiva y peor supervivencia. Sin embargo, el diagnóstico molecular es complejo y costoso, impidiendo su uso en la práctica clínica.

OBJETIVOS, ESTUDIOS REALIZADOS Y RESULTADOS OBTENIDOS:

El primer estudio que compone la tesis doctoral es multicéntrico y prospectivo. Tiene como objetivo determinar la relación entre la carga tumoral molecular en GLs y los factores de riesgo convencionales en pacientes con cáncer de colon en estadios I-II. Se obtuvieron 1940 GLs de 149 pacientes con cáncer de colon con estadio histológico pN0. Se cuantificó la cantidad de ARNm mensajero (ARNm) de citoqueratina 19 (CK19) en los GLs mediante la técnica Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification (RT-LAMP) denominada One-Step Nucleic Acid Amplification. Se definió la carga tumoral total (CTT) de cada paciente como la suma de todas las copias de ARNm de CK19/μL de cada GL positivo por colectomía. Se obtuvo una mediana de 15 GLs por caso (RIC 12;20). La positividad molecular se correlacionó con la presencia de áreas de alto grado (p <0,01), histología mucinosa/anillo de sello (p = 0,017), sexo masculino (p = 0,02), número GLs aislados (p = 0,012) y el peso total de GLs por caso (p < 0,01). La CTT se relacionó con el estadio pT (p = 0,01) y tamaño tumoral (p <0,01) en los tumores de bajo grado. El estudio de regresión logística multivariante mostró una correlación independiente de positividad molecular con el género, grado tumoral y número de GLs en fresco [AUC = 0,71 (IC del 95% = 0,62 a 0,79)].

El objetivo del segundo estudio es evaluar el impacto del tatuaje endoscópico prequirúrgico en la detección molecular de carga tumoral en GLs de neoplasias de colon en estadios iniciales. Métodos: Se trata de un estudio de cohorte prospectivo basado en una población de cribado de CCR en un hospital universitario terciario. Se evaluaron los GLs de colectomías con y sin tatuaje endoscópico preoperatorio mediante dos métodos, HE y RT-LAMP. Se comparó la cantidad de la carga tumoral y los valores de GLs obtenidos entre especímenes tatuados y no tatuados. Resultados: Se evaluaron mediante HE y RT-LAMP 936 GLs obtenidos de 71 colectomías que contenían carcinomas precoces y adenomas endoscópicamente irresecables (8 pT0, 17 pTis, 27 pT1, 19 pT2); 47 de 71 casos (66,2%) estaban tatuados. La positividad molecular en GLs se correlacionó con la presencia de tatuaje ganglionar [p <0,001; odds ratio 3.1 (95% IC 1.7 a 5.5)]. Se obtuvo un número significativamente mayor de GLs en especímenes tatuados en comparación con los no tatuados (mediana 17 GLs vs. 14,5 GLs; p = 0,019).

CONCLUSIONES:

Los resultados de los estudios de la presente tesis doctoral muestran que la detección de ARNm de CK19 en ganglios linfáticos se correlaciona con factores de alto riesgo clásicos en pacientes con cáncer de colon en estadio I-II. La CTT es una medida cuantitativa y objetiva que puede contribuir a una mejor estadificación de pacientes con cáncer de colon precoz.

Asimismo, el tatuaje endoscópico permite la detección de los ganglios linfáticos más proclives a albergar células tumorales y aumenta el número de ganglios linfáticos aislados.

Stage I–II colorectal cancer patients are surgically treated although up to 25 % will recur from disease. Molecular tumour detection in LN of early-stage patients is associated with an increased risk of disease recurrence and poor survival. The first study is a prospective multicentre study aimed to determine the relationship between LN molecular tumour burden and conventional high-risk factors in stage I–II colon cancer patients. A total of 1940 LN from 149 pN0 colon cancer patients were analysed for the amount of tumour CK19 mRNA with the quantitative OSNA molecular assay. Patient’s total tumour load (TTL) resulted from the sum of all CK19 mRNA tumour copies/μL of each positive LN from the colectomy specimen. A median of 15 LN were procured per case. Molecular positivity correlated with high-grade, mucinous/signet ring type, male gender, number of collected LN and total LN weight per case (p≤0.02). The TTL was related to pT stage and tumour size in low-grade tumours (p≤0.01). Multivariate logistic regression showed independent correlation of molecular positivity with gender, tumour grade and number of fresh LN (AUC=0.71). The second study aimed to evaluate the impact of presurgical endoscopic tattooing in early colon neoplasms (i.e. amount of tumour burden in LNs and LN yields). A prospective cohort study from a CRC screening-based population was performed. LNs from colectomies with and without preoperative endoscopic tattooing were assessed by HE and OSNA. HE and OSNA analyses of 936 LNs were performed from 71 colectomies containing early carcinomas and endoscopically unresectable adenomas; 47/71 cases were tattooed. Molecular positivity correlated with the presence of tattoo in LN (p<0.001; OR 3.1). A significantly higher number of LNs were obtained in tattooed specimens (median 17 LN vs. 14.5 LN; p=0.019). In conclusion, lymph node CK19 mRNA detection correlates with classical high-risk factors in stage I–II colon cancer patients. TTL is a quantitative and objective measure that may help to better stage early colon cancer patients. Additionally, endoscopic tattooing enables the analysis of those LNs most prone to harbour tumour cells and improves the number of LN harvested.