Estudio proteómico en pacientes con metástasis hepáticas de cáncer colo-rectal. Identificación de diferentes perfiles proteómicos en relación a los criterios clínico patológicos convencionales de gravedad

Abstract

El Cáncer colorectal (CCR) es un importante problema de salud pública, siendo el tercer cáncer más comúnmente diagnosticado y la cuarta causa de muerte por cáncer en todo el mundo (1). Hasta un 77% de los pacientes con CCR desarrollan metástasis hepáticas durante el seguimiento, y son la principal causa de mortalidad en estos pacientes (11). En los últimos años la proteómica ha jugado un papel importante en la identificación de biomarcadores tumorales asociados a muchas patologías. Estos biomarcadores orientan acerca del pronóstico de la enfermedad en cada caso específico, informan hacia el tratamiento ideal para cada paciente y al entendimiento de la fisiopatología desde el origen de la enfermedad (22, 23).

El presente es un studio proteómico con SELDI- TOF/MS. en tejido hepático en el cual se incluyen un grupo control formado por 10 pacientes sanos y un grupo de 20 pacientes con MHCR. En el grupo control se utiliza tejido hepático sano y en el grupo de MHCR se utiliza tejido tumoral hepático. El estudio para validación se realiza en tejido hepático con MHCR de 85 pacientes. HIPOTESIS: 1) Existe un perfil proteómico específico en el tejido tumoral de los pacientes con MHCR. 2) Dicho perfil proteómico es capaz de predecir el comportamiento clínico de la enfermedad. OBJETIVO PRINCIPAL: Identificar perfiles proteómicos específicos que puedan ser predictivos de un determinado comportamiento clínico de la enfermedad en pacientes con MHCR. 1a.- Establecer una comparación entre los perfiles proteómicos de casos sanos y casos de enfermos con MHCR 2b.- Encontrar una correlación entre la expresión de un panel de proteínas y la agresividad del tumor de acuerdo con los criterios pronósticos de Fong. OBJETIVO SECUNDARIO: Desarrollar marcadores predictivos / pronósticos de metástasis hepáticas para la recidiva después de la resección hepática; no

sólo guiados por los parámetros clínicos, sino también por marcadores moleculares implicados en el proceso de la metástasis hepática. RESULTADOS OBTENIDOS: Han sido detectadas la expresión de 21 proteínas que mostraron diferencias entre los grupos MHCR graves y leves con valores de p significativos. Se identificó un pico de proteína localizado en m/z con 7373 D. (Dalton) que mostró una clara diferencia entre el grupo MHCR y el grupo control (P < 0,0001). Se generó un árbol de clasificación de 4 nodos que fue capaz de distinguir el grupo control, los pacientes con pronóstico leve y pronóstico grave por la combinación de los picos situados a m/z 2970, 2871, 7929 Dalton, obteniendo una curva ROC de 0,994, 0,947 y 0,952 respectivamente. La sensibilidad del algoritmo fue del 100 % y la especificidad fue del 90 %. El árbol de clasificación se obtuvo combinando 2 picos de proteínas diferentes. La primera proteína a considerar se la encuentra en 2970 m / z (P < 0,051) útil para separar a los pacientes leves de los graves. CONCLUSIONES: Para obtener los objetivos planteados en esta tesis se han estudiado un total de 10 tejidos hepáticos sanos y 105 tejidos de MHCR, 20 en el estudio piloto y 85 en el estudio para validación. En este grupo de casos estudiados se demostró que existe un perfil proteómico específico en el tejido hepático tumoral de los pacientes con MHCR. Este perfil proteómico si es capaz de predecir el comportamiento clínico de estos pacientes, por lo tanto, también puede orientar hacia el mejor tratamiento en cada uno de los casos con MHCR. El análisis de los perfiles proteómicos en tejido hepático por el sistema SELDI- TOF/MS, es una herramienta útil para la identificación de nuevos biomarcadores en pacientes con MHCR.

Colorectal cancer (CCR) is a major public health problem, being the third most common cancer and the fourth leading cause of cancer death in the world (1). Up to 77% of CCR patients develop hepatic metastases from CCR (MHCR) during follow-up, with MHCR being the main cause of mortality in these patients (11). This is a proteomic research in liver tissue from patients with Liver metastasis from Colo-rectal cancer. A control group consisting of 10 healthy patients and a group of 20 patients with MHCR treated surgically with curative intention and known clinical behavior of the disease included in the study. The validation research study in 85 liver tissue with MHCR. The process of tissue homogenization for the extraction of proteins is performed. These resulting extracts are fractionated by ion exchange chromatography and analyzed by SELDI-TOF / MS. HYPOTHESIS: 1) There exists a specific proteomic profile in the tumor tissue of patients with MHCR. 2) Such a proteomic profile will be able to predict the clinical behavior of the disease. PRINCIPAL OBJECTIVE: To identify specific proteomic profiles that may be predictive of a particular clinical behavior of the disease in patients with MHCR. 1 a.- To establish a comparison between the proteomic profiles of controls and patients with MHCR 1 b.- Find a correlation between the expression of a panel of proteins and the aggressiveness of the tumor according to the Fong prognostic criteria. SECONDARY OBJECTIVE: Develop predictive markers / prognosis of liver metastases for recurrence after hepatic resection; not only guided by clinical parameters, but also by molecular markers involved in the process of liver metastasis. RESULTS OBTAINED: The expression of 21 proteins showing the differences between the MHCR groups and values with significant p values were detected. A protein peak located in m / z with 7373 D was identified which showed a clear difference between the MHCR group and the control group (P <0.0001). We generated a classification tree of 4 nodes and were able to distinguish controls, patients with mild prognosis and severe prognosis by combining the peaks located in 2970, 2871, 7929 Daltons, obtaining a ROC curve of 0.994, 0.947 And 0.952 respectively. The sensitivity of the algorithm was 100% and the specificity was 90%; the classification tree was obtained by combining 2 different protein peaks. The first protein was found at 2970 m / z (P <0.051) useful for differentiating patients with aggressive liver metastases with less aggressive liver metastases. CONCLUSIONS: To obtain the objectives in this research were studied a total of 10 healthy hepatic tissues and 105 MHCR tissues, 20 in the first study and 85 in the study for validation. In this groups have been demonstrated that exista specific protein profile in the hepatic tumor tissue of patients with MHCR. This proteomic profile is useful for predicting the clinical behavior of these patients, therefore it can also guide towards the best treatment in each case with MHCR. The analysis of protein profiles in the tissue by the SELDI-TOF / MS system is a useful tool for the identification of new biomarkers in patients with MHCR.