Diferenciación plasmocelular en linfomas no-Hodgkin de células B: implicaciones clínicas y terapéuticas

Abstract

La diferenciación plasmocelular es un fenómeno relativamente frecuente en algunos linfomas no-Hodgkin, estos linfomas presentan un bloqueo incompleto de la diferenciación plasmocelular. La diferenciación plasmocelular se ha observado ocasionalmente en MCL y CLL. En el caso del MCL se ha visto que el subtipo indolente, que se caracteriza por ser SOX11-, presenta ciertos niveles de diferenciación plasmocelular. Se ha descrito que el silenciamiento de SOX11 produce una reducción de los niveles de PAX-5, permitiendo así una diferenciación plasmocelular temprana. En el MCL es muy importante la detección de SOX11, sobre todo en los casos ciclina D1 negativos, ya que este factor de transcripción puede segregar los pacientes según el pronóstico. No obstante, debido a la elevada homología que existe entre SOX11 y SOX4, la discriminación entre ambas proteínas dificulta la tarea en el diagnóstico de rutina. En esta tesis doctoral, hemos determinado que los anticuerpos más relevantes para la detección de SOX11 son el anti- SOX11143 y el anti-SOX11MRQ-58. Por western blot, el anti-SOX11MQR-58 parece ser el anticuerpo más sensible y más específico. Por el contrario, en IHQ el anti-SOX11MQR-58 detecta la proteína con menos sensibilidad, siendo el anti-SOX11143 la mejor opción para IHQ. Además, hemos podido observar que dos poblaciones celulares, las células foliculares dendríticas y las células de las vénulas del endotelio alto, también son SOX11+, aunque serán necesarios más estudios para determinar si podría ser un marcador para estas células y para los tumores derivados de ellas.

En la CLL se ha visto que la diferenciación plasmocelular estaba vinculada a la expresión de BLIMP-1, el principal regulador de la diferenciación a célula plasmática. No obstante, los pacientes con CLL no presentan una diferenciación total a célula plasmática. En esta tesis hemos estudiado un conjunto de 137 pacientes, en los cuales hemos visto que la expresión de BLIMP-1 es mucho más frecuente de lo previamente descrito. Hemos encontrado mediante western blot, que la expresión mayoritaria en los pacientes de CLL, tanto en tejido como en sangre periférica, era la isoforma alternativa BLIMP-1Δ6, independientemente del factor de splicing SF3B1. Hemos visto que esta isoforma estaba presente tanto en el núcleo como en el citoplasma, pero mayoritariamente en este último, lo que podría facilitar su interacción con las otras isoformas de BLIMP-1. Mediante la estimulación de las células, derivadas de pacientes de CLL, hemos visto que se producía una diferenciación parcial de las células, aumentando BLIMP-1α, IRF-4 y CD38. En cambio, se mantenían algunos de los factores que definen la identidad de célula B, como PAX-5 o CD19. Además no variaba la expresión de la isoforma alternativa BLIMP-1Δ6. Por lo tanto, la expresión de la isoforma BLIMP-1Δ6 podría ser el responsable del bloqueo de la diferenciación plasmocelular en la CLL. Serían necesarios más estudios para esclarecer el mecanismo por el cual la CLL expresa esta isoforma.

Plasma cell differentiation is a relatively common event in some non-Hodgkin lymphomas; these lymphomas present an incomplete block of plasma cell differentiation. Plasma cell differentiation has been observed occasionally in MCL and CLL. In the case of MCL, the indolent subtype is mainly SOX11 negative and some of them have certain levels of plasma cell differentiation. The SOX11 silencing has been reported to downregulate PAX-5 levels, thus allowing early plasma cell differentiation. The detection of SOX11 is very important in MCL, especially in cyclin D1 negative cases, since this transcription factor could segregate the patients according to prognosis. However, due to the high homology between SOX11 and SOX4, discrimination between both proteins makes difficult the routine diagnosis by IHQ. In this thesis, we determined that the most relevant antibodies to detect SOX11 are anti-SOX11143 and anti-SOXMRQ-58. Western blot analysis have shown that anti-SOX11MRQ-58 is the most sensitive and specific antibody. In contrast, by IHQ the anti-SOX11MRQ-58 detects the protein with less sensitivity, being anti-SOX11143 the best option for IHQ in routine diagnosis.

Some studies identified that plasma cell differentiation in CLL was related to BLIMP-1 expression, the main regulator of plasma cell differentiation. However, CLL patients do not show final plasma cell differentiation. In this thesis we studied 137 patients; we have seen that BLIMP-1 expression is more frequent than previously described. We found by western blot that CLL patients express mainly the alternative isoform BLIMP-

1Δ6, regardless of the mutation status of SF3B1. We have shown that BLIMP-1Δ6 was present in the nucleus and the cytoplasm, but mainly in the last one. The co-localization of different isoforms could facilitate its interaction. Stimulating primary CLL cells with ILs and CpGs, these achieved partial plasma cell differentiation, increasing BLIMP-1α, IRF-4 and CD38. In contrast, some of the factors that define B cell identity such as PAX-5 or CD19 and the expression of the alternative isoform BLIMP-1Δ6, did not vary. Therefore, the BLIMP-1Δ6 expression could be responsible for blocking the plasma cell differentiation in the CLL. Further studies would be needed to clarify the mechanism by which CLL expresses inactive BLIMP-1Δ6 isoform.