Aislamiento y caracterización de clones genómicos codificantes para proteínas de reserva del maíz (Zea mays L.)

Abstract

Se han localizado tres clones genómicos de una genoteca de DNA DE endospermo de maíz construida por restricción parcial SAU3AI y clonaje en la diana BAMHI del vector lambda CHARON-35 positivos a un clon CDNA PME119 que codifica para una glutelina-2 de 28 KD, proteína de reserva del maíz. Los tres Insertor solapan cubriendo una región de genoma de 18.5 KBP. Cuando se alinean con un clon genómico previamente aislado en el laboratorio (ZG1), esta región genómica cubre 20 KBP. La región codificante se localiza centrada, incluida en un fragmento de restricción HINDIII-HIND III de 3.O KBP. Subclonado este en plásmidos de elevado numero de copias como PUC18 se estableció un mapa de restricción. En los tres aislamientos este era plenamente coincidente. La secuencia completa de uno de los fragmentos, clonado en el plásmido P268C, de 2975 BP permitió conocer 1709 BP de región flanqueante a 5', la totalidad de la región codificante y unos 600 BP de la región 3' flanqueante. La comparación de esta secuencia con otras obtenidas en el laboratorio, especialmente con los clones CDNA descritos en la variedad E10 muestran identidad con la excepción de pocas mutaciones puntuales que no producen, con una única excepción, cambios del aminoácido codificado.

Se construyó una genoteca parcial de DNA de endospermo de maíz de la variedad W64A a partir de los fragmentos de DNA HINDIII-HINDIII de tamaños comprendidos entre 3.5 Y 4.5 KBP con la finalidad de aislar clones genomicos codificantes para una ZEINA-II de 16 KD (ZC1). A partir de esta, empleando la sonda PSTI-BAMHI de 300 BP de PME177 se aislaron 5 señales positivas, cuyos insertos resultaron idénticos. La secuenciación de la totalidad del inserto (3870 BP) permitió conocer 1238 BP de secuencia flanqueante 5' y 2038 BP de región flanqueante 3'. Se trata del primer aislamiento genómico de proteínas de reserva de cereales en que se observa una coincidencia completa entre la secuencia del gen y del CDNA.