Estudio inmunogenético e inmunohistoquímico de la arteritis de Horton

Abstract

INTRODUCCIÓN:<br/><br/>La etiopatogenia de la arteritis temporal (AT) es poco conocida. Estudios epidemiológicos sugieren una perdisposición genética a padecer la enfermedad. Por otro lado, la excelente respuesta clínica al tratamiento con corticosteroides y la frecuente demostración en estos pacientes de anomalías inmunológicas inespecíficas como complejos inmunes circulantes y disminución de linfocitos CD8, entre otras, sugieren la participación de fenómenos de autoinmunidad en su patogenia. En diversas enfermedades autoinmunes, la predisposición genética se relaciona con el Sistema Mayor de Histocompatibilidad o sistema HLA, conjunto de genes cuyos productos participan en la regulación de la respuesta inmune. Estudios recientes sugieren, efectivamente, una elevada prevalencia del antígeno HLA-DR4 en estos pacientes. <br/><br/>En este contexto, hemos diseñado un ESTUDIO INMUNOGENÉTICO de cara a profundizar en 1as relaciones de la AT con el SMH y un ESTUDIO INMUMOHISTOQUÍMICO de cara a esclarecer los mecanismos efectores a través de los cuales los fenómenos de autoinmunidad desarrollan la lesión vascular. <br/><br/>1. ESTUDIO INMUNOGENÉTICO<br/><br/>1.1. OBJETIVOS. 1.- Determinar la prevalencia de los antígenos de clase I (A, B, C) y de clase II (DE y DQ) del SMH en un grupo de pacientes con AT. 2.- Valorar si alguna de las manifestaciones clínicas de la enfermedad se halla especialmente relacionada con el SMH. 3.- Determinar si la presencia de determinado/s antígeno/s confiere mayor severidad a la enfermedad. <br/><br/>1.2. PACIENTES Y MÉTODOS.<br/><br/>- Pacientes. 85 enfermos (17 v. y 48 m.) con diagnóstico histológico de AT, 44 de los cuales sufrían además polimialgia reumática que en 10 casos condicionaba una severa incapacitación. <br/>- Grupo control: 200 donantes sanos.<br/>- Métodos: Se investigaron los antígenos reconocidos en el "Workshop" de 1984 mediante microlinfocitotoxicidad sobre linfocitos T (antígenos de clase I) y sobre linfocitos B (antígenos de clase II).<br/><br/>1.3. RESULTADOS<br/><br/>Se observó un aumento significativo de DR4 en los pacientes con AT en relación con el grupo control (40% vs 20%, Pc<0,05). No obstante, la asociación fue más estrecha en los pacientes con PMR (58,8%, Pc<0,001). La frecuencia de DR4 en los pacientes con PMR fue superior a la obtenida en los pacientes sin PMR (18,3%) (P<0,005). DRA estuvo presente en el 88,8% de los pacientes con PMR incapacitante, significativamente más frecuente que en los pacientes con síntomas moderados (41,6%) (P<0,05).<br/><br/>Se obtuvo también una disminución en la frecuencia de DR2 en los pacientes con PMR respecto a los sin PMR, pero las diferencias no fueron significativas. Aunque no se obervó un incremento significativo de DR3, la prevalencia de heterozigotos DR3-DR4 fue superior en los pacientes (12%) que en la población control (3.5%) (p<0.01). La frecuencia de DR3-DR4 fue todavía superior en los pacientes con PMR (17,8%). En los pacientes sin PMR, la prevalencia de DR3-DR4 (16,5%) fue similar a la encontrada en la población control (3,5%).<br/><br/>1.4. DISCUSION.<br/><br/>Nuestros resultados confirmaron en nuestro país la asociación previamente descrita en otros países entre el antígeno DR4 Y la AT. El hallazgo más relevante de nuestro estudio es la constatación de que el antígeno DR4 se asocia principalmente a la existencia de PMR. Este hecho contribuye a clarificar las controvertidas relaciones entre AT y PMR entre los pacientes con AT, únicamente aquellos genéticamente predispuestos desarrollarán PMR. La similitud inmunogenética entre la PMR y la artritis reumatoide, asociada al antígeno DR4 con unas características parecidas, clarifica también las relaciones clínicas y evolutivas entre ambos procesos. <br/><br/>2.- ESTUDIO INMUNOHISTOQUÍMICO<br/><br/>2.1. OBJETIVOS. 1.- Caracterizar el fenotipo del infiltrado inflamatorio de la AT y establecer su relación con la cronología de la enfermedad. 2.- Valorar la influencia del tratamiento sobre la distribución de las poblaciones celulares y sus antígenos de activación inmunológica.<br/><br/>2.2. MATERIAL Y MÉTODOS.<br/><br/>- Material. 24 fragmentos de arteria temporal pertenecientes a otros tantos pacientes con diagnóstico histológico AT. Diecisiete de ellas fueron obtenidos previamente o dentro de los 4 primeros días tras el inicio del tratamiento y los siete restantes se recogen en un intervalo entre 5 días y 18 meses tras el inicio del mismo.<br/>- Métodos. Se utilizaron las técnicas inmunohistoquímicas avidina-biotina-peroxidasa y fosfatasa alcalina-antifosfatasa alcalina con los siguientes anticuerpos monoclonales: CD3 (linfocitos T), CD4 (subpoblación T colaboradora), CD8 (subpoblación T supresora citotóxica), CD19 (linfocitos B), CD57 (células K), CD25 (receptor de la IL-2), EBH11 (macrófagos) y EDU-l (HLA-DR). Se utilizaron asimismo los antisueros polivalentes anti-lisozina (macrófagos) y anti B-100 (células interdigitantes).<br/><br/>2.3. RESULTADOS.<br/><br/>La presencia de células interdigitantes (IRC) S-100 positivas, se objetivó en 8 (41%) de las 22 biopsias estudiadas. La duración de los síntomas craneales antes de la biopsia fue inferior en los pacientes con IEC (x 1,5 meses) que en los pacientes sin IEC (x 3,8 meses) (p<0,05).<br/><br/>En 10 de 22 casos (45%) los macrófagos fueron la población predominante. En 8 (41%) hubo una proporción similar de linfocitos T y macrófagos y en las 3 restantes (14%) predominaban los linfocitos T. Esta distribución no resultó influenciada por el tratamiento ni por el tiempo de evolución de la enfermedad antes de la biopsia. La positividad para el HLA-DR fue intensa y seguía una distribución similar a a la población de macrófagos. Los linfocitos B fueron escasos y las células K ausentes en todas las muestras. Entre los linfocitos T la subpoblaclón CD4 predominaba claramente sobre la CD8 en 18 (22%) de 22 muestras mientras que en las restantes 4 (16%) la proporción fue similar.<br/><br/>No se encontró relación entre la distribución de las subpoblaciones T y el tiempo de evolución de la enfermedad o el tratamiento. La expresión del receptor de la IL-2 se observó en 15 de 23 casos (65%) y fue significativamente más frecuente (87'5%) en los pacientes biopsiados antes o dentro de los primeros cuatro días de tratamiento que en los pacientes biopsiados posteriormente (14%) (p<0,005).<br/><br/>2.4. DISCUSIÓN.<br/><br/>La presencia de células con función presentadora de antígenos (IRC) en las lesiones de AT, demostrada por primera vez en nuestro estudio, sugiere una inducción local de una respuesta inmune dirigida frente a antígenos presentes en la pared arterial. El hecho de que estas células se encuentren con mayor frecuencia en lesiones más recientes está de acuerdo con su papel en las fases iniciales de la respuesta inflamatoria. Nuestros datos sugieren, asimismo, que el daño vascular se halla mediado por los macrófagos DR positivos activados por los linfocitos CD4. La presencia no predominante de linfocitos CD9, así como la ausencia de células K no sugiere la participación de citotoxicidad celular directa o citotoxici dad celular anticuerpo-dependiente como mecanismos efectores. La Administración de corticosteroides no parece influir sobre la distribución de la celularidad. Sí, en cambio, induce importantes cambios funcionales como parece indicar la desaparición del receptor de la IL-2 a los cuatro días de tratamiento.

1.- IMMUNOGENETIC STUDY.<br/><br/>HLA class II antigens were determined in 65 patients with biopsy-proven temporal arteritis (TA). An increase in DR4 antigen frequency was found in the patients (40%) compared with that in 200 healthy controls (20%) (Pcorr < 0,05). DR4 was significantly more frequent in GCA patients with polymyalgia rheumatica (PMR) than in those without PMR (58, 8% versus 19, 3%) (P < 0,005). HLA-DR4 frequency in TA patients without PMR was similar to that in the control population (29%). Patients with severe, disabling PMR had DR4 more frequently (80%) than did those with moderate symptoms who required medical care because of cranial arteritis manifestations (41,6%) (P < 0,05). In TA patients, association withDR4 is mainly related to the manifestation of the disease as PMR. Clinical and immunogenetic similarities between PMR and other DR4 associated rheumatic disorders are discussed. Common immunopathogenic mechanisms leading to clinical overlap among then are suggested. <br/><br/>2.- PHENOTYPIC CHARACTERIZATION OF INFILTRATING CELLS OF TA LESIONS.<br/><br/>Immunohistochemical studies on temporal artery biopsy specimens from 24 patients with biopsy-proven TA were performed. Interdigitating reticulus cells were observed in 41% of the patients. Disease duration was significantly shorter in these patients than in patients lacking IEC (mean 1,5 months versus 3,8 months). Infiltrating cells consisted predominantly of HLA-DR-expressing macrophages and T lymphocites, especially of the CDA subset. There were few B cells and no K cells. No relationship between cellular distribution and disease duration of treatment was found. Interleukin-2 receptor expression was observed in 87,5% of biopsy specimens obtained prior to or within the first four days of treatment with predininone, but in only 14% of specimens obtained later. The presence of interdigitating reticulus cells in patients with TA suggests an autoimmune reaction against an antigenic substance that resides in the arterial wall and is presented in situ. Arterial damage is probably mediated by DR expressing macrophages activated by CD4 + T lymphocytes. The non predominance of CD8 cells as well as the absence of K cells not suggests cellular cytotoxicity or antibody-dependent cellular cytotoxicity as effector mechanisms. Corticosteroids do not modify cellular distribution but induce important functional changes, as demonstrated by the disappearance of interleukin-2 receptor expression in patients treated for > 4 days.