Alteraciones en el funcionalismo de los macrófagos del sistema GALT (Gut-associated lymphoid tissue). Relación con la translocación bacteriana y el desarrollo de peritonitis bacteriana espontánea sobre un modelo de cirrosis experimental

Abstract

INTRODUCCIÓN: La peritonitis bacteriana espontánea(PBE) es una complicación grave de la cirrosis descompensada. La traslocación bacteriana (TB) y la inmunodepresión asociadas a la cirrosis desempeñan un papel clave en su desarrollo. Las células inmunitarias del tejido linfoide asociado al intestino (GALT) desempeñan un papel importante en el mantenimiento de la respuesta inmunológica intestinal y la prevención de la entrada de patógenos. Antibióticos como el norfloxacino presentan un efecto inmunomodulador que podría favorecer la respuesta inmunológica en los pacientes con cirrosis descompensada. Sin embargo, no se conoce el funcionalismo de los macrófagos del GALT en la cirrosis y su implicación en el desarrollo de TB y de PBE, y se desconoce cuál es el efecto del norfloxacino en las células del GALT. OBJETIVOS: En un modelo experimental de rata con cirrosis y ascitis, determinar si existe un déficit y a qué nivel (opsonización, fagocitosis y/o killing intracelular) en la función de los macrófagos del GALT y del líquido ascítico. Determinar el efecto del norfloxacino sobre estas células. MATERIAL Y MÉTODOS: Se incluyeron un grupo control (n=10) y 3 grupos de ratas cirróticas por CCl4 (A: Cirrosis con ascitis, n=10; B: Cirrosis con ascitis+norfloxacino, n=10; C: Cirrosis+PBE, n=10). Se obtuvieron el lavado peritoneal/ascitis (LA), los ganglios mesentéricos (GM), las placas de Peyer (PP) y la lámina propria de colon (LP). De cada compartimento del GALT se obtuvo una suspensión celular mediante digestión mecánica y enzimática. Mediante citometría, se cuantificó la fagocitosis de E.coli de los macrófagos CD11b+ de cada compartimento, el efecto de la opsonización con un“pool” de sueros de ratas cirróticas y controles, y la capacidad bactericida. Se cuantificaron los niveles de TNF-α, IFN-γ, PCR, complemento C3, NO y endotoxina plasmáticos de cada animal. RESULTADOS: No hubieron diferencias en la capacidad fagocítica de los macrófagos de los diferentes compartimentos entre los 4 grupos. La fagocitosis aumentó significativamente cuando se opsonizaron las bacterias con “pool” de sueros control frente a “pool” de sueros cirróticos, en todos los compartimentos y con independencia del grupo de estudio. El Killing intracelular fue significativamente menor en todos los compartimentos de los grupos A y C en comparación con el control y se correlacionó de forma inversa con los niveles plasmáticos de endotoxina, NO, PCR , TNFα y IFNγ, y de forma directa con los niveles de C3. La administración de norfloxacino mejoró significativamente el killing intracel·lular. CONCLUSIONES: La funcionalidad de los macrófagos del sistema GALT en ratas cirróticas con ascitis está alterada globalmente, con una menor capacidad de opsonización y un menor killing intracel·lular. La alteración de la capacidad bactericida se correlaciona con la endotoxemia y los marcadores plasmáticos de inflamación. La administración de norfloxacino consigue restaurar parcialmente su funcionalidad.

BACKGROUND: Spontaneous bacterial peritonitis (SBP) is a serious complication of decompensated cirrhosis. Bacterial translocation (TB) and immunosuppression associated with cirrhosis play a key role in its development. Immune cells in the gut-associated lymphoid tissue (GALT) play an important role in maintaining intestinal immune response and prevent the entry of pathogens. Antibiotics such as norfloxacin have an immunomodulatory effect that could favour the immune response in patients with decompensated cirrhosis. However, GALT macrophages function in cirrhosis and its involvement in the development of TB and PBE and the effect of norfloxacin on GALT cells is not known. AIMS: To determine in an experimental rat model of cirrhosis and ascites, whether there is a deficiciency and at what level (opsonization, phagocytosis and / or intracellular killing) in the macrophage function of the GALT and ascites. To determine the effect of norfloxacin on these cells. METHODS: A control group (n = 10) and 3 groups of cirrhotic rats with ascites by CCl4 (A: cirrhosis and ascites, n=10; B: cirrhosis and ascites + norfloxacin, n=10; C: cirrhosis+SBP, n=10) were included. Peritoneal lavage / ascites (LA), mesenteric lymph (GM), Peyer's patches (PP) and colonic lamina propria (LP) macrophages were obtained. A cell suspension from every GALT compartment was obtained by mechanical and enzymatic digestion. E.coli phagocytosis of CD11b + macrophages of each compartment, the opsonization effect of a "pool" of cirrhotic rats sera and controls rats sera, and the bactericidal capacity were assessed by flow citometry. TNF-α, IFN-γ, CRP, complement C3, NO and endotoxin plasma levels from each animal were quantified. RESULTS: There were no differences in the phagocytic capacity of macrophages of the different compartments between the 4 groups. Phagocytosis significantly increased when bacteria were opsonized with "pool" of control sera versus "pool" of cirrhotic sera, in all compartments and regardless of the study group. Intracellular Killing was significantly lower in all compartments of the A and C groups compared to control ghroup and was inversely correlated with plasma levels of endotoxin, NO, CRP, TNFα and IFNγ, and directly correlated with levels C3. The administration of norfloxacin significantly improved intracellular killing. CONCLUSIONS: GALT system macrophages functionality is globally impaired in rats with cirrhotic ascites, with a decreased opsonic capacity and intracellular killing. Impaired intracellullar killing correlates with plasma endotoxemia and inflammatory markers. Treatment with norfloxacin partially improves GALT macrophage functionality.