Sortida del virus de l'hepatitis A dels hepatòcits: implicacions en la selecció d'antivirals

dc.contributor
Universitat de Barcelona. Departament de Genètica, Microbiologia i Estadística
dc.contributor.author
Castellarnau Serra, Montserrat de
dc.date.accessioned
2018-10-30T12:39:02Z
dc.date.available
2018-10-30T12:39:02Z
dc.date.issued
2018-09-20
dc.identifier.uri
http://hdl.handle.net/10803/663455
dc.description.abstract
El virus de l’hepatitis A (HAV), el prototip del gènere Hepatovirus, té una sèrie de característiques que el diferencien de la resta de membres de la família Picornaviridae. Entre aquestes, la via de sortida descrita recentment a través dels cossos multivesiculars al interior d’exosomes, ha provocat un canvi de paradigma important en la biologia del virus de l’HAV. El mecanisme de classificació de l’HAV dins de les vesícules intraluminals dels cossos multivesiculars, implica la interacció de la càpsida del virus amb la proteïna ALIX. En el present treball, utilitzant dues soques de l’HAV que difereixen en la seva capacitat de replicació, es mostra com la proteïna ALIX té un paper important en la formació de les partícules pseudoembolcallades de l’HAV en els hepatòcits humans. Gran part de les partícules virals alliberades en els sobrenedants de cultiu in vitro presenten el fenotip pseudoembolcallat del virus de l’HAV. Els hepatòcits humans (línia cel·lular Huh7-AI) responen a la replicació del virus augmentant els nivells d’expressió del mRNA d'ALIX. Les cèl·lules Huh7-AI infectades amb una soca de creixement ràpid de l’HAV (HM175-HP; HP) mostren un augment significativament superior de l'expressió d’ALIX, respecte les cèl·lules infectades amb una soca de creixement lent (HM175-L0; L0). Addicionalment, la soca HP mostra ser molt menys sensible al silenciament d'ALIX que la soca L0. L'anàlisi a través de microscòpia confocal quantitativa de la càpsida de l’HAV i la proteïna ALIX en cèl·lules Huh7-AI, mostra una major proporció de càpsides d’HP que colocalitzen amb ALIX que en L0. Aquests resultats suggereixen una major eficiència d’interacció de les càpsides d’HP amb ALIX, que correlaciona directament amb la major quantitat de càpsides alliberades a l’interior d’exosomes per part d’aquesta soca de l’HAV. El fenotip de creixement ràpid de la soca HP respon a una combinació de funcions les quals inclouen, un IRES més eficient, un ús optimitzat de codons i una major eficiència de sortida de la cèl·lula. A més, aquest treball mostra com el mecanisme de sortida del virus pot ser un bon objectiu per a l’estudi de noves teràpies antivirals basades en la inhibició de la sortida del virus. L’estudi mostra com el ionòfor monensina pot ser un bon candidat com a potencial antiviral multidiana per a l’HAV. Aquesta droga, utilitzada per a la inhibició de la via de sortida, mostra també efectes inhibidors sobre les fases inicials del cicle del virus.
en_US
dc.description.abstract
Hepatitis A virus (HAV) is a hepatotropic member of the Picornaviridae family with very special molecular features. Among these features, an unexpected exit pathway through its envelopment into exosomes has been recently described. The mechanism of HAV sorting into the exosome-containing multi-vesicular bodies involves the interaction with the ALIX protein. In the present work using two HAV strains, which differ in their replication capacity, we show that indeed ALIX plays a role in the formation of HAV quasi-enveloped particles in human hepatocytes. Human hepatocytes (Huh7-AI cell line) show an increased level of expression of ALIX over time, and they respond to virus replication by increasing the levels of ALIX mRNA synthesis. Huh7-AI cells infected with a fast-growing strain of HAV (HM175-HP; HP) showed an increase of ALIX expression compared to cells infected with a slow-growing strain (HM175-L0; L0). Additionally, the HP strain showed to be much less sensitive to ALIX silencing than the L0 strain. Analysis of quantitative confocal microscopy of the capsid protein and ALIX, in Huh7-AI cells, revealed a higher proportion of HP capsids rather than L0 capsids co-localizing with ALIX. These results point out to a more efficient interaction of HP capsids with ALIX, which correlates with a higher release of capsid containing-exosomes in the HP population. The fast-growing phenotype of the HP strain respond to a combination of features including a more efficient IRES, an optimized codon usage and a more efficient system to egress from the cell. Moreover, this work shows how the mechanism of virus egress could be a potential target for new antiviral therapy.
en_US
dc.format.extent
247 p.
en_US
dc.format.mimetype
application/pdf
dc.language.iso
cat
en_US
dc.publisher
Universitat de Barcelona
dc.rights.license
ADVERTIMENT. L'accés als continguts d'aquesta tesi doctoral i la seva utilització ha de respectar els drets de la persona autora. Pot ser utilitzada per a consulta o estudi personal, així com en activitats o materials d'investigació i docència en els termes establerts a l'art. 32 del Text Refós de la Llei de Propietat Intel·lectual (RDL 1/1996). Per altres utilitzacions es requereix l'autorització prèvia i expressa de la persona autora. En qualsevol cas, en la utilització dels seus continguts caldrà indicar de forma clara el nom i cognoms de la persona autora i el títol de la tesi doctoral. No s'autoritza la seva reproducció o altres formes d'explotació efectuades amb finalitats de lucre ni la seva comunicació pública des d'un lloc aliè al servei TDX. Tampoc s'autoritza la presentació del seu contingut en una finestra o marc aliè a TDX (framing). Aquesta reserva de drets afecta tant als continguts de la tesi com als seus resums i índexs.
dc.source
TDX (Tesis Doctorals en Xarxa)
dc.subject
Virus de l'hepatitis A
en_US
dc.subject
Virus de la hepatitis A
en_US
dc.subject
Hepatitis A virus
en_US
dc.subject
Cèl·lules hepàtiques
en_US
dc.subject
Células hepáticas
en_US
dc.subject
Liver cells
en_US
dc.subject
Medicaments antívírics
en_US
dc.subject
Antivirales
en_US
dc.subject
Antiviral agents
en_US
dc.subject.other
Ciències Experimentals i Matemàtiques
en_US
dc.title
Sortida del virus de l'hepatitis A dels hepatòcits: implicacions en la selecció d'antivirals
en_US
dc.type
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
dc.type
info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.subject.udc
577
en_US
dc.contributor.director
Pintó Solé, Rosa María
dc.contributor.director
Bosch, Albert
dc.contributor.tutor
Pintó Solé, Rosa María
dc.embargo.terms
cap
en_US
dc.rights.accessLevel
info:eu-repo/semantics/openAccess


Documentos

MdCS_TESI.pdf

3.413Mb PDF

Este ítem aparece en la(s) siguiente(s) colección(ones)