Nuevos marcadores biológicos para el diagnóstico y pronóstico de la leucemia linfática crónica

Abstract

La leucemia linfática crónica (LLC) es el tipo de neoplasia de célula B madura más frecuente en países occidentales. Su diagnóstico se basa en la detección de células leucémicas que presentan un patrón antigénico específico; sin embargo, existe un porcentaje de casos que presentan características atípicas, lo cual dificulta su diagnóstico. Por otra parte el curso clínico de la enfermedad es extremadamente heterogéneo y aunque se han identificado una gran variedad de marcadores clínicos y biológicos que permiten predecir de forma más precisa el curso clínico de los pacientes, sigue habiendo un gran interés en profundizar en la investigación en este campo ya que la gran mayoría de marcadores descritos no son realmente útiles en la práctica clínica bien porque no han llegado a ser estandarizados, carecen de significado biológico o son redundantes. En la presente tesis se ha analizado la expresión de dos moléculas, CD200 y FcγRIIb, con el objetivo de discernir si, en primer lugar, CD200 podría permitir mejorar el diagnóstico de la LLC, en particular el de aquellos casos con LLC atípica; y en segundo lugar, explorar si el co-receptor FcγRIIb, que regula la activación del BCR, podría ser un marcador útil para predecir la evolución clínica de los pacientes con LLC. En el primer estudio de esta tesis se evaluó la expresión de CD200 en síndromes linfoproliferativos crónicos de células B (SLPC-B) y se comparó su sensibilidad, especificidad y precisión con las obtenidas de los marcadores utilizados en clínica para establecer el diagnóstico de LLC; CD5, CD23, CD79b, FMC7 y la Inmunoglobulina de superficie (SmIg, por sus siglas en inglés). Los resultados demostraron que CD200 se expresaba con alta intensidad en la práctica totalidad de las células de LLC y de forma más débil en el resto de SLPC-B; no obstante, una pequeña proporción de casos de este último grupo mostraron expresión positiva del marcador. Además CD200 mostró alta sensibilidad y baja especificidad, pero su precisión para establecer el diagnóstico diferencial de la LLC fue equivalente al del resto de marcadores. Por otro lado, se analizó si la incorporación de 18 CD200 mejoraba la precisión del sistema de Matutes para establecer el diagnóstico diferencial y se observó que su inclusión mejoraba la clasificación de los pacientes de LLC incluso cuando era sustituido SmIg. Estos hallazgos demostraron que CD200 no es específico de la LLC, pero su combinación con CD5, CD23, CD79b y FMC7 contribuye a mejorar el diagnóstico de la enfermedad. En el segundo estudio, se evaluó la expresión del receptor FcγRIIb en células leucémicas y se comparó su expresión con la obtenida en células B normales de donantes sanos. Las células leucémicas mostraron niveles de expresión de FcγRIIb similares a las células B normales de donantes sanos, aunque con un comportamiento intraclonal heterogéneo. Además se estudió la correlación de su expresión con los marcadores más comúnmente utilizados en clínica para estudiar el pronóstico de la enfermedad, y se analizó la relación entre los niveles de expresión del receptor y el tiempo de supervivencia libre de tratamiento (SLT) en pacientes de LLC no tratados. Los resultados mostraron que la expresión de FcγRIIb correlacionaba de forma débil con la expresión de CD49d y con una SLT más prolongada. En conclusión, esta tesis contribuye al conocimiento de la expresión de CD200 y FcγRIIb en células leucémicas de pacientes en el momento del diagnóstico y/o en estadíos tempranos de la enfermedad y pone de manifiesto la utilidad de CD200 para establecer el diagnóstico diferencial de esta enfermedad con otros SLPC-B y el valor pronóstico de la expresión FcγRIIb en los pacientes con LLC.

Chronic Lymphocytic leukemia (CLL) is the most common mature B-cell neoplasm in Western Countries. The diagnosis of CLL is based on the detection of leukemic cells with a specific immunophenotype; nevertheless some cases present atypical features, which make the diagnostic process an intensive labor. The prognosis of CLL is extremely heterogeneous and although a high variety of molecular markers have been identified to predict the evolution of the disease, most of them have not been yet standardized because of the lack of reproducibility or biologic significance. This is the main reason why researchers are interested in gaining more insights into this issue. In this thesis the expression of CD200 and FcγRIIb was analyzed in CLL cells to investigate; first, if CD200 allows to improve the diagnosis of CLL, and particularly in those cases with atypical CLL; second, to explore whether the co-receptor FcγRIIb, that regulates the activation of B-cell receptor, could be a useful marker to evaluate the prognosis of CLL patients in an accurate form. In the first study of this thesis, the expression of CD200 was evaluated in patients with B-cell Chronic Lymphoproliferative disorders (B-CLPD) and the sensitivity, specificity and accuracy of this marker to establish the diagnosis of CLL was compared with those obtained from CD5, CD23, CD79b, FMC7 and surface membrane immunoglobulin (SmIg). The results showed that CD200 was expressed with high intensity in the whole CLL cell population, while other B-CLPD had lower intensity. However, there were a reduced number of other B-CLPD cases with positive expression of CD200. Moreover, CD200 had high sensitivity and low specificity, but the accuracy of this marker was similar to that obtained with other markers. In addition, we studied if CD200 added accuracy to Matutes Score and we observed that the substitution of SmIg by CD200 improved the CLL diagnosis. These results showed that CD200 is a valuable, albeit not 22 specific, CLL diagnostic marker and the combined use of CD200 with CD5, CD23, CD79b and FMC7 improved the accuracy of CLL disease. The second study analyzed the expression of FcγRIIb expression on CLL cells, which was compared with the expression of this receptor on normal B-cells from healthy donors. Leukemic cells showed similar levels of FcγRIIb to normal B-cells, although this expression was heterogeneous on intraclonal leukemic cells. Moreover, we studied the association between expression of FcγRIIb and other prognostic markers and the correlation between FcγRIIb expression and disease outcome. FcγRIIb and CD49d expression showed low correlation, but no other associations were detected. However, patients with high FcγRIIb levels tend to have longer treatment free survival rates. Overall, this thesis contributes to the knowledge of CD200 and FcγRIIb expression in CLL cells at diagnosis and/or in early stages of the disease, and points out the usefulness of these markers to establish the differential diagnosis of CLL with other B-CLPD and the prognostic value of FcγRIIb in CLL patients.