Mecanismos de resistencia a las quinolonas en Serratia marcescens

Abstract

Esta tesis doctoral forma parte de un conjunto de trabajos desarrollados por el grupo de investigación del Dr. M. Viñas del Departamento de Microbiología y Parasitología Sanitarias de Ia Division de Ciencias de Ia Salud de la Universidad de Barcelona.

La mayoría de los trabajos publicados hacen referenda a especies como Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa o Staphylococcus aureus, pero en Serratia marcescens los mecanismos de resistencia han sido poco estudiados. Sin embargo S. marcescens ha producido durante los ultimos afws un inusual elevado número de episodios infecciosos en los centros hospitalarios españoles, además estudios epidemiológicos han constatado un elevado porcentaje de aislados resistentes a las fluoroquinolonas en Serratia y Enterobacter, que es superior a cualquier otro género de las enterobacteriáceas.

El objetivo principal de esta tesis ha sido Ia de aportar más conocimientos en el estudio de los mecanismos de resistencia a l as quinolonas en S. marcescens.

Los objetivos concretes de la presente tesis doctoral son:

1. La obtención y caracterización de mutantes espontáneos resistentes at ciprofloxacino obtenidos in vitro.

2. Investigar la importancia de la membrana externa (papel del lipopolisacarido y porinas) y las características fisicoquímicas de las quinolonas (hidrofobicidad y grado de protonacion en funcion del pH externo) en la acumulación de estos antibióticos por Ia bacteria S. marcescens.

3. Comprobar si existen variaciones en la acumulación del ciprofloxacino,debido a Ia competencia por la vía de entrada, incubando este antibiótico simultanéamente con otros agentes antibacterianos que pasan a través de las porinas.

4. La busqueda y caracterización de bombas de reflujo en Serratia marcescens, ya que una baja permeabilidad no podría explicar por sí sola niveles significativos de resistencia clínica, de tal manera que sería/n necesario/s otro/s mecanismo/s que actuaran de forma sinérgica. Se cree que este segundo factor podría ser el reflujo o extrusión de substancias.

5. Estudiar el mecanismo de acción antibacteriano del ciprofloxacino y ácido nalídxico en S. marcescens.

6. Estudiar las variaciones de la susceptibilidad y acumulación de quinolonas en presencia de analgésicos (ácido salicílico y paracetamol).

7. El estudio comparativo de Ia acumulación y susceptibilidad de los derivados del ciprofloxacino en S. marcescens.

8. Comparar Ia acumulación y susceptibilidad del ciprofloxacino en S. marcescens, Escherichia coli, Pseudomonas aeru9inosa y Staphylococcus aureus.

9. Comprobar si existe alguna mutación en la región QRDR (quinolone resistance determining region) comprendida entre los residuos ala-67 y gln -106 de la subunidad A de la DNA girasa, ya que algunas mutaciones puntuales en GyrA de la DNA-girasa causan elevada resistencia.