Desenvolupament i utilització de llevats recombinants com a plataforma vacunal. Seguretat, eficàcia i propietats immunomoduladores

Abstract

ENG- Yeast are considered the first microorganisms used by humans to process food and alcoholic beverages. The technology developed from these ancient processes has formed the foundation of modern industrial biotechnology. In this thesis, the use of Pichia pastoris as an expression system for the production of recombinant proteins is highlighted, particularly in the field of bio-pharmaceutical products and industrial enzymes. The implementation of this technology for recombinant protein expression using this microorganism is described, using flexible vectors allowing the customization of recombinant expression characteristics.

To validate this implementation, the development of vaccine antigens to protect rabbits against Rabbit Hemorrhagic Disease (RHD), including a new variant (RHDV2), is described. The RHDV capsid protein, VP60, has been used as the basis for these antigens, demonstrating their ability to form virus-like particles (VLPs) and provide complete protection against experimental homologous infection. Surprisingly, a high dose of RHDV2 antigen also provided cross-protection against the classical RHDV variant in rabbits, opening up new opportunities in the production of highly effective commercial vaccines.

In summary, this thesis has successfully implemented a new technology for the production of effective vaccine antigens using Pichia pastoris as an expression system. These antigens offer protection against Rabbit Hemorrhagic Disease, including different variants, and represent a significant advancement in vaccine production for this disease

CAT- Els llevats es consideren els primers microorganismes utilitzats pels humans per processar aliments i begudes alcohòliques. La tecnologia desenvolupada a partir d'aquests antics processos ha estat la base de la biotecnologia industrial moderna. En aquesta tesi, es destaca la utilització de Pichia pastoris com a sistema d’expressió per a la producció de proteïnes recombinants, especialment en productes biofarmacèutics i enzims industrials. Es descriu la implementació a l’empresa d’aquesta tecnologia d'expressió de proteïnes recombinants utilitzant aquest microorganisme, amb vectors flexibles que permeten personalitzar les característiques de l'expressió recombinant. Per tal de validar aquesta implementació, es descriu el desenvolupament d'antígens vacunals per protegir els conills contra la Malaltia Hemorràgica del Conill (RHD), incloent-ne una nova variant (RHDV2). S'ha utilitzat la proteïna VP60 de RHDV com a base per als antígens, demostrant que poden formar partícules similars a virus (VLP) i proporcionar una protecció completa contra la infecció experimental homòloga. Sorprenentment, una dosi elevada d'antigen de RHDV2 també va proporcionar protecció creuada contra la variant clàssica de RHDV en conills, obrint noves oportunitats en la producció de noves vacunes comercials altament eficaces. En resum, aquesta tesi ha aconseguit implementar una nova tecnologia per a la producció d'antígens vacunals eficaços mitjançant l'ús de Pichia pastoris com a sistema d’expressió. Aquests antígens ofereixen protecció contra la Malaltia Hemorràgica del Conill, incloent-ne diferents variants, i representen un avenç significatiu en la producció de vacunes per a aquesta malaltia