El decaimento de la vid. Enfermedades de la madera relacionadas con hongos de la familia Botryosphaeriaceae

Abstract

Los hongos de la familia Botryosphaeriaceae causan daños en la madera de la vid en regiones vitícolas de todo el mundo. Para caracterizar las distintas enfermedades de madera de la vid en planta adulta y para conocer el impacto de estos patógenos en Cataluña, se llevó a cabo un muestreo en viñedos afectados de diferentes denominaciones de origen catalanas. Los resultados confirmaron la existencia en Cataluña de las tres enfermedades de la vid más comunes en planta adulta (yesca, eutipiosis y BDA [black dead arm]), y evidenciaron asimismo la dificultad para diagnosticarlas, debido a la múltiple y frecuente concurrencia de éstas sobre una misma planta. Las especies fúngicas aisladas con mayor frecuencia fueron Phaeomoniella chlamydospora, Fomitiporia mediterranea, Eutypa lata y distintas especies de Botryosphaeriaceae. Dentro de esta familia se identificaron seis especies, siendo por orden de abundancia Diplodia seriata, Neofusicoccum parvum, Dothiorella viticola, Botryosphaeria dothidea, N. luteum y N. vitifusiforme. La controversia taxonómica que presenta la familia Botryosphaeriaceae, debido a las similitudes morfológicas entre taxones, se resolvió con el estudio combinado de la morfología de los conidios de los anamorfos y la información molecular de distintas regiones del ADN. Mediante la técnica de la PCR-cooperativa y el empleo posterior de una sonda de hibridación específica, se desarrolló una herramienta molecular de gran sensibilidad para la detección rápida y rutinaria de las especies de Botryosphaeriaceae. La sonda se diseñó sobre la región nuclear del ITS (espaciadores internos de transcripción) del ARNr, e identificó de forma específica a un grupo de siete especies de Botryosphaeriaceae (las seis aisladas de vides catalanas más Diplodia mutila). Profundizando en la caracterización de la familia, se estudió la capacidad de cinco especies (B. dothidea, Di. seriata, Do. viticola, N. luteum y N. parvum) para producir micotoxinas. Todos los aislados estudiados produjeron compuestos hidrofílicos fitotóxicos, aunque N. luteum y N. parvum destacaron por la fitotoxicidad que también mostraron sus compuestos lipofílicos. Esto corroboró los resultados de las pruebas de patogenicidad, en las que N. luteum y N. parvum mostraron una gran virulencia. Dothiorella viticola, N. vitifusiforme y Di. seriata mostraron una virulencia débil o nula, mientras que B. dothidea mostró un carácter patogénico intermedio. Sobre la susceptibilidad del hospedador a los distintos patógenos, se observó que el portainjerto Ru140 fue el menos susceptible y el 41B el más susceptible, mientras que las seis variedades de uva ensayadas (Cabernet-Sauvignon, Garnacha, Macabeo, Parellada, Tempranillo y Xarel·lo) no mostraron diferencias claras de susceptibilidad. Se constató que algunas especies vegetales que comparten su hábitat con la vid, como almendros, encinas, jaras, melocotoneros y nogales, son susceptibles a algunas especies de Botryosphaeriaceae, y que por tanto podrían actuar como hospedadores alternativos de los patógenos. De los factores abióticos que podrían afectar al desarrollo de las enfermedades se estudió el estrés hídrico. Los resultados obtenidos mostraron que tanto el estrés hídrico como el patógeno N. parvum alteraron parámetros fisiológicos y de crecimiento de la vid, aunque no se observó un efecto combinado de ambos sobre la planta. Además, la longitud de las necrosis vasculares causadas por N. parvum no aumentó significativamente con el estrés hídrico, confirmando que N. parvum es un patógeno primario y no un patógeno de debilidad.

Species in the fungal family Botryosphaeriaceae are known for causing grapevine trunk diseases in grape-producer regions worldwide. Declining vineyards were surveyed in Catalonia (NE Spain) to characterize those diseases on adult plants and to identify their causing agents. Most comon grapevine trunk diseases (esca, Eutypa dieback and black dead arm disease) were confirmed to occur in Catalonia. However, concurrence of symptoms in the same plant, belonging to at least two different diseases, often difficults disease diagnosis. Most frequently isolated fungal pathogens were Phaeomoniella chlamydospora, Fomitiporia mediterranea, Eutypa lata and several species of Botryosphaeriaceae. Six botryosphaeriaceous species were identified, in decreasing abundance order: Diplodia seriata, Neofusicoccum parvum, Dothiorella viticola, Botryosphaeria dothidea, N. luteum and N. vitifusiforme. The controversy in the taxonomy of Botryosphaeriaceae due to confusing morphological similarities among the species was resolved by combining the study of conidial morphology and multigene nucleotide data. A sensitive tool for a rapid detection of Botryosphaeriaceae species was developed based on the co-operational PCR technique and the use of a hybridization probe. The probe was designed to target the ITS region (internal transcribed spacers) of the rRNA repeat. It identified specifically the above Botryosphaeriaceae species isolated from grapevine plus Diplodia mutila. Five botryosphaeriaceuos species were tested for mycotoxin production, namely B. dothidea, Di. seriata, Do. viticola, N. luteum and N. parvum. All species produced hydrofilic phytotoxic compounds, and N. luteum and N. parvum were also shown to produce low-weight lipophilic toxins. These results support the high virulence showed by N. luteum and N. parvum in the patogenicity test. Virulence of Dothiorella viticola, N. vitifusiforme and Di. seriata was weak to low, while B. dothidea showed an intermediate virulence. In terms of host susceptibility, rootstock 140Ru was the less susceptible to the botryosphaeriaceous fungi tested while 41B was the most susceptible one. However, no great differences in susceptibility were observed among the six grapevine varieties tested (Cabernet Sauvignon, Grenache, Macabeo, Parellada, Tempranillo and Xarel·lo). Some plant species from the surroundings of vineyards, namely almond, peach and walnut trees, holm oak and rockroses, were shown to be susceptible to some Botryosphaeriaceae species. It is hypothesized that these species could act as alternative hosts for those pathogens. Hydric stress in combination with N. parvum infection was studied as a potential factor that could affect disease development. Physiological and growth parameters of grapevine were modified by both hydric stress and N. parvum main effects, but no combined effects were detected. Vascular necroses were similar in both stressed and non-stressed grapevines, therefore N. parvum is not considered as a weakness pathogen.