Aportación al conocimiento de Aspergillus sección Nigri

Abstract

Los integrantes de la sección Nigri sonunos de los más importantes del género Aspergillus. De distribución ubicua, algunas de sus especies se utilizan ampliamente en la industria alimentaria y poseen la categoria de GRAS("generally regarded as safe") de la FDA. Pese a ello, se ha descrito la capacidad de elaborar ocratoxina A(OA)por parte de los integrantes del agregado A.niger, lo que supone un riesgo inesperado para la salud humana y animal. Por otro lado, la taxonomia de la seccion Nigri es una de las más complejas del genero y esta basada fundamentalmente en criterios morfologicos. En una de las últimas revisiones se creó el agregado A.niger, constituido por dos especies, seis variedades y dos formas. En un intento de clarificar la taxonomía del agregado, se ha propuesto la división del agregado en dos especies, morfológicamente indistinguibles, denominadas A.niger y A.tubingensis atendiendo a patrones de RFLP obtenidos del DNA total. En el presente trabajo se determinó la frecuencia de aparición de las especies del genero Aspergillus y en especial de las especies de la sección Nigri en piensos y materias primas y se estudió la capacidad ocratoxigénica de las cepas de esta sección. Con el fin de estudiar la distribución de las dos especies propuestas en los substratos estudiados describimos una nueva tecnica de RFLP más sencilla y fácil de interpretar y que permite diferenciar de forma más clara estos grupos de cepas. Paralelamente, se realizó un estudio de las características morfológicas macroscopicas y microscópicas de las cepas y su comportamiento a distintas temperaturas y concentraciones de NaC1. De entre los resultados obtenidos, destacamos los siguientes: Las especies del género Aspergillus se aislaron frecuentemente en los substratos estudiados, en especial en piensos. Su recuento parcial en este tipo de muestras representó más del 50% del recuento fungico total. De las especies productoras de OA aisladas en el presente estudio, la frencuencia de aislamiento de A.niger fue superior a la de A.ochraceus. Las cepas tipo de las dos especies propuestas en el agregado A.niger, A.niger CBS 55.65 y A.tubingensis CBS 134.48 resultaron estar muy próximas en terminos filogenéticos, por lo que podría tratarse de una misma especie. La digestión con RsaI del fragmento 5.8S-ITS rDNA amplificado mediante PCR fue un sistema facil, practico y rapido para clasificar cepas del agregado a.niger en dos grupos llamados N y T que se corresponden con las dos especies propuestas. Las cepas de los dos grupos N y T fueron morfológicamente indistinguibles. Las pequeñas diferencias observadas no constituyeron una característica practica para diferenciar ambos grupos. La temperatura optima de crecimiento de las cepas del agregado A.niger fue de 35º C, no desarrollándose por debajo de 10ºC, ni por encima de los 50ºC. Al considerar la división del agregado en los grupos N y T, las cepas tipo T presentaron una temperatura optima de 35ºC y las tipo N de 30-35ºC. Las cepas tipo T se diferenciaron de las tipo N por desarrollase más rapidamente a la temperatura mas baja (10ºC) en la que se obtuvo el desarrollo de las especies del agregado. El crecimiento de las cepas del agregado. A.niger se vio favorecido a concentraciones bajas de cloruro sódico, observándose una mayor tolerancia a 25º C que a 35ºC. Los grupos de cepas N y T presentaron una respuesta similar al NaC1. Todas las cepas ocratoxigenicas del agregado A.niger con patron del RFLP conocido pertenecen al grupo N, por lo que los aislamientos del grupo T parecen no ser capaces de producir OA.