Análisis de RAS en plasma en cáncer colorrectal metastásico: impacto de la fracción mutante alélica en pronóstico

Abstract

Introducción: A pesar de los importantes avances en el tratamiento del cáncer de colon metastásico (mCRC), la supervivencia sigue siendo corta. Existen diversos factores pronósticos y predictivos que se han de tener en cuenta, entre ellos la mutación del oncogén RAS presente en más del 40% de tumores. Esta mutación suele ser determinada en tejido sólido pero dada la imposibilidad en ocasiones de obtener suficiente muestra y la heterogeneidad tumoral, la determinación de dicha mutación en el DNA circulante en sangre (biopsia líquida) puede ser realizada por ejemplo mediante BEAMing (basada en la PCR digital). La hipótesis principal de este estudio es que la determinación cuantitativa de esta mutación (fracción mutante alélica –MAF-) podría ser un factor pronóstico o predictor en mCRC. Material y métodos: Se trata de un estudio retrospectivo que incluye 110 pacientes procedentes de dos centros. Se han recogido las principales variables clínicas, patológicas y de supervivencia de estos pacientes así como la determinación de RAS en tejido sólido por la técnica habitual. La determinación de la MAF en plasma se ha realizado mediante la técnica del BEAMing y se ha establecido la correlación con la mutación en tejido sólido mediante PCR en tiempo real. Se ha analizado el impacto pronóstico en supervivencia global (OS) y libre de progresión (PFS) de la MAF de RAS en una población homogénea tratada de forma similar, así como correlación con distintas variables. Resultados: En el total de la población de estudio, se han detectado 62 pacientes (56.4%) que presentaban en plasma alguna mutación de RAS mediante BEAMing. La concordancia entre la determinación mediante PCR en tejido sólido y el BEAMing en plasma fue del 90% con un índice estimado Kappa de Cohen 0.80 (IC 95% 0.68-0.91). No se han objetivado diferencias estadísticamente significativas en OS entre la población RAS mutada y no mutada en tejido sólido y en plasma. Con el fin de homogeneizar la población para el análisis pronóstico de la MAF de RAS se han seleccionado un total de 42 pacientes que no habían recibido cirugía de lesiones metastásicas. No se ha observado correlación estadísticamente significativa con la mayoría de las variables clínicas analizadas salvo localización de metástasis. El análisis de la MAF de RAS basal previo al tratamiento de primera línea reveló una correlación significativa con OS (HR = 3.514; p = 0.00066), siendo los pacientes con menores niveles de MAF de RAS los que tienen una OS mayor. Asimismo, los pacientes con menores niveles de MAF presentaron una mayor PFS aunque no fue estadísticamente significativa dicha tendencia. En el análisis multivariante en primera línea la MAF fue un factor pronóstico independiente en OS (HR = 2.73; p = 0.006) y PFS (HR = 3.74; p = 0.049). Asimismo, la MAF fue más alta en aquellos pacientes con progresión de enfermedad como mejor respuesta (p= 0.007). Conclusiones: La MAF en plasma de RAS puede ser un factor pronóstico en los pacientes con mCRC RAS mutados pudiendo ayudar al clínico a tomar decisiones sobre el tratamiento de dicha enfermedad. No obstante, dada la naturaleza del estudio, es necesario estudios más amplios y prospectivos que puedan validar el uso de esta técnica en la práctica clínica.

Introduction: Despite recent major advances in metastatic colorrectal cancer (mCRC), survival is still poor. There are different prognostic and predictive factors to be taken into account, among them, RAS mutation which is observed in 40% of all tumors. This mutation is determined in solid biopsy but sometimes, as it is not possible to get enough sample for this determination and due to tumor heterogeneity, this mutational status can be analyzed from circulating DNA in blood (liquid biopsy) using BEAMing for instance (a digital PCR-based technology). The main hypothesis of this study is to analyze whether quantitative determination of this mutation (mutant allele fraction-MAF-) could be a prognostic or predictive factor for RAS mutant mCRC. Material and Methods: This is a retrospective study comprising a total of 110 patients from two different sites. Main clinical, pathological and survival data have been recorded as well as determination of RAS mutational status in solid biopsy using routine techniques. MAF determination in plasma has been determined using BEAMing and correlation with mutational status in solid tissue using real time PCR has been analyzed. Prognosis impact in overall survival (OS) and progression free survival (PFS) of RAS MAF in a homogenous cohort has been analyzed as well its correlation with different variables. Results: In the whole population, RAS mutation in plasma has been detected with BEAMing in a total of 62 patients (56.4%). Concordance between real time PCR in solid biopsy and BEAMing in plasma is 90% with an estimated Cohen Kappa index of 0.80 (95% CI 0.68-0.91). No statistical significant differences in OS have been detected between RAS mutant and wild type in solid and liquid biopsy. In order to make population homogenous regarding prognosis impact of RAS MAF, a total of 42 patients who have not been operated for metastatic disease have been selected. There are not statistical significant correlations with the most part of the clinical variables except for metastases location. RAS MAF prior to first line therapy shows a significant correlation with OS (HR = 3.514; p = 0.00066), as RAS MAF is lower in patients with longer OS. Moreover, patients with lower MAF show a trend to longer PFS that is not statistically significant. In the multi-variant analysis, RAS MAF is an independent prognosis factor for OS (HR = 2.73; p = 0.006) and PFS (HR = 3.74; p = 0.049). Moreover, patients with higher MAF tend to have progressive disease as best response to treatment (p = 0.007). Conclusions: RAS MAF in plasma could be an independent prognosis factor in patients with RAS mutant mCRC and may help clinicians to make decisions about management of this disease. However, due to the characteristics of this study, prospective studies are needed to validate this technique for the use in the daily practice.