Ensayo piloto de trasplante pulmonar porcino para el análisis de la lesión de isquemia-reperfusión tras isquemia fría prolongada

Abstract

El temps d'isquèmia de l'injert és un tema controvertit en el trasplantament pulmonar degut a que es va establir de forma arbitrària. Per aquest motiu l'objectiu d'aquest estudi és analitzar l'impacte del temps d'isquèmia freda (CIT) perllongat sobre la lesió IR en un model experimental. Assaig pilot experimental aleatoritzat de grups paral·lels i anàlisi cec final utilitzant un model de TP en porcs. Es van extreure els òrgans dels animals donants (n = 8). Els pulmons es van conservar durant 6 hores (n = 4) o 12 hores (n = 4) en hipotèrmia aeròbica. El pulmó esquerre es va trasplantar i es va reperfundir durant 4 hores. Es van obtenir biòpsies de pulmó (i) a l'inici del CIT, (ii) a la fi del CIT, (iii) 30 minuts després de la reperfusió i (iv) 4 hores després de la reperfusió. Els empelts de pulmó es van avaluar histològicament mitjançant la puntuació de dany histològic pulmonar i la relació de pes humit i pes sec. La resposta inflamatòria es va valorar mitjançant la determinació de citoquines inflamatòries. Es va determinar l'activitat de caspasa-3 com a marcador d'apoptosi. No observem diferències en la puntuació de dany histològic pulmonar o en la relació de pes humit i pes sec en un moment donat entre els pulmons sotmesos a 6 h-CIT o 12 h-CIT. Les IL-1 i IL-6 van mostrar una tendència ascendent durant la reperfusió en els dos grups. El TNF-a va aconseguir el seu punt màxim dins dels 30 minuts posteriors a la reperfusió. Tot just es va detectar IFN-g. La inmunoexpressió de caspasa-3 es va classificar semiquantitativament pel percentatge de cèl·lules tenyides. Es va observar un 30% de cèl·lules apoptòtiques 30 minuts després de la reperfusió. Observem que 6 i 12 hores de CIT van ser equivalents en termes de dany histològic pulmonar, perfil inflamatori i apoptosi en un model de TP en porcs. L'extensió de la lesió pulmonar, mesurada per la puntuació de dany histològic pulmonar, les citoquines proinflamatòries i la determinació de caspasa-3 va ser lleu.

El tiempo de isquemia del injerto es un tema controvertido en el trasplante pulmonar debido a que se estableció de forma arbitraria. Por este motivo el objetivo de este estudio es analizar el impacto del tiempo de isquemia fría (CIT) prolongado sobre la lesión de isquemia-reperfusión (IR) en un modelo experimental. Ensayo piloto experimental aleatorizado de grupos paralelos y análisis ciego final utilizando un modelo de TP en cerdos. Se extrajeron los órganos de los animales donantes (n = 8). Los pulmones se conservaron durante 6 horas (n = 4) o 12 horas (n = 4) en hipotermia aeróbica. El pulmón izquierdo se trasplantó y reperfundió durante 4 horas. Se obtuvieron biopsias de pulmón (i) al comienzo del CIT, (ii) al final del CIT, (iii) 30 minutos después de la reperfusión y (iv) 4 horas después de la reperfusión. Los injertos de pulmón se evaluaron histológicamente mediante la puntuación de daño histológico pulmonar y la relación de peso húmedo y peso seco. La respuesta inflamatoria se valoró mediante la determinación de citoquinas inflamatorias. Se determinó la actividad de caspasa-3 como marcador de apoptosis. No observamos diferencias en la puntuación de daño histológico pulmonar o en la relación de peso húmedo y peso seco en un momento dado entre los pulmones sometidos a 6 h-CIT o 12 h-CIT. Las IL-1 e IL-6 mostraron una tendencia ascendente durante la reperfusión en ambos grupos. El TNF-a alcanzó su punto máximo dentro de los 30 minutos posteriores a la reperfusión. Apenas se detectó IFN-g. La inmunoexpresión de caspasa-3 se clasificó semicuantitativamente por el porcentaje de células teñidas. Se observó un 30% de células apoptóticas 30 minutos después de la reperfusión. Observamos que 6 y 12 horas de CIT fueron equivalentes en términos de daño histológico pulmonar, perfil inflamatorio y apoptosis en un modelo de TP en cerdos. La extensión de la lesión pulmonar, medida por la puntuación de daño histológico pulmonar, las citoquinas proinflamatorias y la determinación de caspasa-3 fue leve.

In lung transplantation, the length of ischemia time is controversial as it was arbitrarily stablished. We ought to explore the impact of extended cold-ischemia time (CIT) on ischemia-reperfusion injury in an experimental model. Experimental, randomized pilot trial of parallel groups and final blind analysis using a swine model of lung transplantation. Donor animals (n = 8) were submitted to organ procurement. Lungs were subjected to 6 h (n = 4) or 12 h (n = 4) aerobic hypothermic preservation. The left lung was transplanted and re-perfused for 4 h. Lung biopsies were obtained at (i) the beginning of CIT, (ii) the end of CIT, (iii) 30 min after reperfusion, and (iv) 4 h after reperfusion. Lung-grafts were histologically assessed by microscopic lung injury score and wet-to-dry ratio. Inflammatory response was measured by determination of inflammatory cytokines. Caspase-3 activity was determined as apoptosis marker. We observed no differences on lung injury score or wet-to-dry ratio any given time between lungs subjected to 6 h-CIT or 12h-CIT. IL-1 and IL6 showed an upward trend during reperfusion in both groups. TNF-a was peaked within 30 min of reperfusion. IFNg was hardly detected. Caspase-3 immunoexpression was graded semiquantitatively by the percentage of stained cells. Thirty percent of apoptotic cells were observed 30 min after reperfusion. We observed that 6 and 12 h of CIT were equivalent in terms of microscopic lung injury, inflammatory profile and apoptosis in a lung transplantation swine model. The extent of lung injury measured by microscopic lung injury score, proinflammatory cytokines and caspase-3 determination was mild.