Molecular analysis of MTOC assembly - the role of ninein-like protein

Autor/a

Paz Domínguez, Joel

Director/a

Lüders, Jens

Tutor/a

Soriano García, Eduardo

Fecha de defensa

2021-12-14

Páginas

221 p.



Departamento/Instituto

Universitat de Barcelona. Facultat de Biologia

Resumen

Despite decades of work, the molecular requirements underlying microtubule- organizing center (MTOC) formation at the centrosome remain obscure. Progress is hindered by the complexity of this organelle, which is composed of hundreds of proteins that are involved in a range of functions, many unrelated to microtubule organization. To avoid such intricacy, we studied MTOC formation at an ectopic site. Employing a domain previously identified in a splice variant of the centrosome protein Cnn in Drosophila, we targeted fusion proteins to the cytoplasmic surface of mitochondria in human U2OS cells. We tested several human candidate proteins based on their described relationship with MTOCs such as CDK5RAP2, CEP192, NIN, NINL and CKAP5. MTOC formation capacity was analysed by probing for recruitment of the nucleator γTuRC and for microtubule nucleation activity. Interestingly, multiple candidates were able to recruit γTuRC to the ectopic site. However, only an N-terminal fragment of NINL was able to also induce microtubule nucleation similar to the CM1 region of CDK5RAP2, which served as positive control. Noteworthy, CKAP5 induced microtubule formation at the ectopic site independently of γTuRC. Testing of NINL truncation mutants allowed mapping of separate regions required for γTuRC binding and nucleation activation. Biotin- proximity labelling of mitochondrial surface-targeted NINL fragments further identified additional candidate proteins involved in these functions. Using super resolution microscopy, we found endogenous NINL to associate with subdistal appendages (SDAs) of the mother centriole, pointing to a possible role of NINL in MTOC formation at SDAs.

Palabras clave

Microtúbuls; Microtúbulos; Microtubules; Nucleació; Nucleación; Nucleation; Bioquímica; Biochemistry; Biologia molecular; Biología molecular; Molecular biology

Materias

577 - Bioquímica. Biología molecular. Biofísica

Área de conocimiento

Ciències Experimentals i Matemàtiques

Nota

Programa de Doctorat en Biomedicina / Tesi realitzada a l'Institut de Recerca Biomèdica de Barcelona (IRBB)

Documentos

JPD_PhD_THESIS.pdf

6.783Mb

 

Derechos

ADVERTIMENT. Tots els drets reservats. L'accés als continguts d'aquesta tesi doctoral i la seva utilització ha de respectar els drets de la persona autora. Pot ser utilitzada per a consulta o estudi personal, així com en activitats o materials d'investigació i docència en els termes establerts a l'art. 32 del Text Refós de la Llei de Propietat Intel·lectual (RDL 1/1996). Per altres utilitzacions es requereix l'autorització prèvia i expressa de la persona autora. En qualsevol cas, en la utilització dels seus continguts caldrà indicar de forma clara el nom i cognoms de la persona autora i el títol de la tesi doctoral. No s'autoritza la seva reproducció o altres formes d'explotació efectuades amb finalitats de lucre ni la seva comunicació pública des d'un lloc aliè al servei TDX. Tampoc s'autoritza la presentació del seu contingut en una finestra o marc aliè a TDX (framing). Aquesta reserva de drets afecta tant als continguts de la tesi com als seus resums i índexs.

Este ítem aparece en la(s) siguiente(s) colección(ones)