Caracterizació molecular d'un nou receptor inmunològic restringit al llinatge mieolomonoític

Abstract

Per tal d'identificar nous membres de la família de receptors CD300L, es va fer una cerca a la base de dades genòmica utilitzant les seqüències d'IREM-1 (nou receptor inhibidor identificat en el nostre laboratori) i CMRF-35, i es va descriure un nou membre de la família anomenat "immune receptor expressed on myeloid cells" (IREM-2/CD300e). El gen localitzat en el cromosoma 17q25.1 codifica per una proteïna de 205 aminoàcids formada per una regió extracel·lular amb un domini immunoglobulina i una regió transmembrana amb un residu carregat positivament (Lys), el qual permet predir la seva possible associació a una molècula adaptadora. La interacció entre IREM-2 i DAP-12 es va confirmar en cèl·lules COS transfectades. Emprant els anticossos específics generats amb cèl·lules de sang perifèrica i del moll de l'os vàrem observar que l'expressió d'IREM-2 està restringida a cèl·lules hematopoètiques madures del llinatge mielomonocític. La diferenciació in vitro a macròfags o cèl·lules dendrítiques immadures provoca una disminució de l'expressió d'IREM-2. L'estimulació, amb els anticossos específics, d'IREM-2 en la línia cel·lular RBL (leucèmia basofílica de rata) juntament amb DAP-12 indueix l'activitat transcripcional d'NFAT i en absència de DAP-12 es requereix la presència d'un coestímul, el PMA, per produir activitat transcripcional. A més a més, l'estimulació d'IREM-2 en monòcits indueix la producció de TNF- i l'alliberació de calci intracel·lular. Com a conclusió, aquests resultats indiquen que IREM-2 és un nou receptor activador de la superfamilía de les immunoglobulines expressat en el llinatge mielomonocític.

Homology BLAST search was carried out using a sequence encoding for a novel inhibitory receptor (IREM-1) cloned in our laboratory and a previously described homologous sequence termed CMRF-35. Based on this information, we cloned a full-length cDNA corresponding to a novel member of this family, termed IREM-2. The gene, located in cr. 17q25.1, encodes for a protein of 205 amino acids that contains an extracellular region comprising an Ig-like domain and a transmembrane region with a positively charged amino acid residue (Lys), that predicted its putative association with an adapter molecule. Indeed, the interaction between IREM-2 and DAP-12 was confirmed in transfected COS-7 cells. By generating specific antibodies and using bone marrow and peripheral mononuclear cells we observed that IREM-2 expression appeared restricted to mature hematopoietic cells of the monocytic and myeloid dendritic cell lineages. In vitro differentiation to macrophages or immature dendritic cells down-regulated IREM-2 expression. Upon engagement with the specific mAbs, IREM-2 expressed in rat basophilic leukaemia (RBL) cells together with DAP-12, induced NFAT transcriptional activity; moreover IREM-2 engagement on monocytes induced TNF-alpha production. Taken together, our results indicate that IREM-2 is a novel activating receptor of the Ig-superfamily in the monocytic lineage.