Universitat Pompeu Fabra
Andreu Martínez, David
Llevadot i Esquerda, Roser
2021-05-10
177 p.
Universitat Pompeu Fabra. Departament de Ciències Experimentals i de la Salut
Serologic tests detecting anti- T. gondii IgM are the gold standard for the diagnosis of acute toxoplasmosis. Nevertheless, most commercial kits are based on lysate antigens obtained from tachyzoites grown in mice or tissue culture which present inherent limitations in terms of performance, providing erroneous results to the physicians thus hindering patient management and requiring stringent regulation. In this context, peptide-based antigens have emerged as an attractive alternative to overcome several of such issues. In this thesis we focused on designing and synthetizing a novel T. gondii IgM-specific chimeric peptide that was used to develop a chemiluminescent immunoassay for the detection of anti-T. gondii IgMs. Additionally, we aimed to assess mouse monoclonal humanized chimeric antibodies as an alternative source to the human positive plasma-derived samples that are currently used to produce reference materials, such as calibrators and controls. Along with its specific results, this thesis provides a set of innovative technologies to discover IgM-specific sequences translating them into robust antigens, to optimize immunoassay formulations, and to replace the current supply-chain of reference materials.
Les proves serològiques que detecten IgMs contra T. gondii són referents en el diagnòstic de la toxoplasmosi aguda. No obstant, la majoria de kits comercials es basen en lisats antigènics obtinguts de taquizoïts cultivats en ratolins o cultius tissulars, els quals presenten limitacions inherents en termes de rendiment, proporcionant resultats erronis als metges, dificultant per tant el maneig dels pacients i exigint una rigorosa regulació. En aquest context, els antígens basats en pèptids resulten una alternativa atractiva per a superar alguns d’aquests problemes. En aquesta tesi ens hem centrat en el disseny i síntesi d’un nou pèptid quimèric específic per la detecció de IgM contra T. gondii, que hem utilitzat per a desenvolupar un immunoassaig quimioluminescent per a la detecció d’IgMs contra T. gondii. A més, la tesi ha tingut com a objectiu avaluar una font alternativa a les mostres positives derivades del plasma humà que actualment s’utilitzen per produir materials de referència com són els calibradors i controls. Més enllà dels resultats, aquesta tesi proporciona un compendi de tecnologies innovadores per descobrir seqüències IgM específiques, traduint-les en antígens fiables, optimitzar la formulació dels immunoassaigs, substituir l’actual cadena de subministrament de materials de referència.
Synthetic peptides; Biomaterials; Immunoassay performance; Toxoplasmosis diagnosis; IgM contra T gondii; Pèptids sintètics; Biomaterials; Rendiment immunològic; Diagnòstic de la toxoplasmosi; Anti-T. gondii IgM
615 - Farmacologia. Terapèutica. Toxicologia. Radiologia
ADVERTIMENT. Tots els drets reservats. L'accés als continguts d'aquesta tesi doctoral i la seva utilització ha de respectar els drets de la persona autora. Pot ser utilitzada per a consulta o estudi personal, així com en activitats o materials d'investigació i docència en els termes establerts a l'art. 32 del Text Refós de la Llei de Propietat Intel·lectual (RDL 1/1996). Per altres utilitzacions es requereix l'autorització prèvia i expressa de la persona autora. En qualsevol cas, en la utilització dels seus continguts caldrà indicar de forma clara el nom i cognoms de la persona autora i el títol de la tesi doctoral. No s'autoritza la seva reproducció o altres formes d'explotació efectuades amb finalitats de lucre ni la seva comunicació pública des d'un lloc aliè al servei TDX. Tampoc s'autoritza la presentació del seu contingut en una finestra o marc aliè a TDX (framing). Aquesta reserva de drets afecta tant als continguts de la tesi com als seus resums i índexs.
